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求助)明明有抗原免疫荧光却检测不到阳性结果
2018-05-16 22:19

  这个帖子发布于

  12年零309天

  前,此中的消息可能已发生改变或有所成长。

  组织的免疫荧光,检测GFP的表达环境。该组织用流式阐发,简直有细胞表达GFP(如图,横轴为GFP,纵轴为PE)。可是我在镜下间接察看固定后的组织,却见不到GFP的绿色。用免疫荧光检测(FITC标识表记标帜GFP),也见不到特异的染色(根基满是布景)。GFP的抗体虽然不是特地做组化的,可是在此外组织中检测,没有问题。请问这可能是什么缘由?我该当怎样办才能检测到GFP的表达环境呢??

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  针对你所描述的环境来看 我认为缘由是:

  1,抗体没有和抗原发生特同性连系。GFP该当是绿色荧光卵白,关于此的材料我领会不多,若是GFP与目标卵白转染后位于细胞内,想让抗体与抗原连系就必需通透细胞或组织,因而洗液该当含有诸如Triton-100如许的去污剂。

  2,选择适合做免疫组化的抗体。这点一般仿单会提到的,并且选择合适的抗体间接影响成果的黑白。

  “怎样办才能检测到GFP的表达环境呢。”能够采用保守的检测阐发仪,如荧光分光光度计等,有前提最好采用荧鲜明微镜来阐发。

  2005-07-13 11:24

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  therem

  其实我思疑是我要标本的GFP的表达太弱。

  你所提到的缘由1,2,我有做了阳性control,同样的抗体在同样的环境下简直能够检测到。凡是细胞胞质的染色需要triton处置么?我本来认为只要在核内染色才需要triton的。anyway,值得试一试。

  抗体虽然效价不高,可是该当是好使的,并且我也搞不到其他的GFP抗体了,所以生怕这点我很难改良啊....

  关于“能够采用保守的检测阐发仪,如荧光分光光度计等,有前提最好采用荧鲜明微镜来阐发。”, 汗,我就是荧鲜明微镜看不到荧光啊....别的,我用流式曾经晓得了GFP有表达,我就是想检测表达pattern的....

  2005-07-13 21:38

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